Phát triển vector biểu hiện mang promoter Pgrac100 được cảm ứng bởi IPTG và sáp nhập gen gfp+ vào bộ gen vi khuẩn Bacillus subtilis tại locus lacA

Tóm tắt

Bacillus subtilis là một loại vi khuẩn gram dương có nhiều đặc điểm thuận lợi trong sản xuất protein tái tổ hợp ở các lĩnh vực công nghiệp, nông nghiệp, y dược và thực phẩm. Nghiên cứu được thực hiện nhằm phát triển hệ thống biểu hiện cảm ứng chứa promoter Pgrac100 được sáp nhập tại vị trí lacA trong bộ gen của vi khuẩn B. subtilis. Kết quả cho thấy, promoter Pgrac100 có thể kiểm soát chặt chẽ sự biểu hiện protein mục tiêu trong hệ thống sáp nhập với tỷ lệ cảm ứng lần lượt đạt 3,3, 7,6 và 10,8 sau 4 giờ nuôi cấy với chất cảm ứng biểu hiện protein (Isopropulβ-D-
1-thiogalactopyranoside - IPTG) ở các nồng độ 0,01, 0,1 và 1,0 mM. Thời gian cảm ứng và nồng độ IPTG có ảnh hưởng quan trọng đến hiệu quả biểu hiện protein mục tiêu. Sau 4 giờ nuôi cấy cảm ứng với 0,1 mM IPTG, chủng B. subtilis sáp nhập mang promoter Pgrac100 cho hiệu quả biểu hiện protein cao nhất với lượng GFP chiếm 13% protein tổng số tế bào. Hệ thống vector sáp nhập chứa promoter Pgrac100 có tiềm năng ứng dụng trong nghiên cứu cơ bản và sản xuất công nghiệp.