Tối ưu quy trình PCR đa mồi phát hiện một số gen kháng carbapenem ở Klebsiella pneumoniae

Tóm tắt

Enterobacterales kháng carbapenem được Tổ chức Y tế Thế giới xếp vào nhóm tác nhân vi khuẩn nguy hiểm nhất đối với sức khỏe cộng đồng, trong đó có Klebsiella pneumoniae. Nghiên cứu này nhằm thiết kế và tối ưu hai phản ứng PCR đa mồi (mPCR) phát hiện đồng thời 5 gen kháng carbapenem ở K. pneumoniae là bla_KPC, bla_IMP, bla_VIM, bla_NDM và bla_OXA-48-like gồm mPCR1 và mPCR2. Sử dụng DNA được tách từ khuẩn lạc bằng phương pháp sốc nhiệt với chứng dương gồm các chủng vi khuẩn và plasmid mang gen đích đã được khẳng định bằng giải trình tự để thiết kế và tối ưu mPCR. Kết quả đã tối ưu thành công mPCR1 (Ta 54ºC, nồng độ mồi bla_KPC, bla_IMP, bla_VIM lần lượt là 0,4; 0,2; 0,3 µM) và mPCR2 (Ta 58ºC, nồng độ mồi blaNDM 0,5 µM, bla_OXA-48-like 0,3 µM). Thử nghiệm mPCR tối ưu trên 30 chủng K. pneumoniae phân lập từ mẫu lâm sàng tại Bệnh viện Quân y 103 ghi nhận 26,7% (8/30) chủng mang gen mã hóa carbapenemase, chủ yếu là các chủng mang đơn gen chiếm 75,0% (6/8); các chủng mang tổ hợp 2 gen chiếm 25,0% (2/8); không phát hiện được chủng mang gen bla_IMP và bla_VIM. Quy trình mPCR được tối ưu là cơ sở sàng lọc nhanh một số gen mã hóa carbapenemase của K. pneumoniae trên mẫu lâm sàng, góp phần hỗ trợ lựa chọn điều trị và kiểm soát nhiễm khuẩn.